微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板
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第十次實(shí)驗(yàn)分離產(chǎn)淀粉酶微生物
學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院
專業(yè)：生物科學(xué)類
年級(jí)：20xx級(jí)
姓名：
學(xué)號(hào)：1007040085
20xx年XX月XX日
實(shí)驗(yàn)十分離產(chǎn)淀粉酶的微生物
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。
2、學(xué)習(xí)各種無菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。
3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認(rèn)識(shí)為微生物存在的普遍性，體會(huì)無菌操作的重要性。
5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗(yàn)方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡(jiǎn)單單細(xì)胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實(shí)驗(yàn)采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合，該方法操作簡(jiǎn)單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：
1)稀釋后的細(xì)胞懸液圖不在平板上可以分離得單個(gè)菌株
2)在適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件（如營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細(xì)菌，能產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌能生長(zhǎng)，且菌落周圍出現(xiàn)透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來。本實(shí)驗(yàn)采用透明圈檢驗(yàn)法檢測(cè)培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長(zhǎng)。
三、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
1、器材：
培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑：
配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。
3、土樣：
取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g，地下10cm左右。
四、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：
1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個(gè)平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g
蛋白胨1%……………………………………4g
NaCl0.5%…………………………………..2g
瓊脂2%……………………………………..8g
淀粉0.5%........................................2g
pH……………………………………7.0~7.2
（2）無菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報(bào)紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。
�。�3）器皿的準(zhǔn)備
將刻度吸管用報(bào)紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2）倒11個(gè)平板和7支試管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液：
稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養(yǎng)：
0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對(duì)象，將其分別涂布在3個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個(gè)培養(yǎng)基，標(biāo)號(hào)，37°C溫箱培養(yǎng)48h。
4、選取目的菌株：
兩天后對(duì)土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，并取兩個(gè)菌落形態(tài)完全一致的分散的單個(gè)菌落，對(duì)其中一個(gè)噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如果出現(xiàn)透明圈說明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細(xì)菌明顯的性狀。
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