DNA的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)報(bào)告
在學(xué)習(xí)、工作生活中，需要使用報(bào)告的情況越來(lái)越多，報(bào)告具有成文事后性的特點(diǎn)。相信很多朋友都對(duì)寫報(bào)告感到非常苦惱吧，下面是小編收集整理的DNA的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)報(bào)告，歡迎大家借鑒與參考，希望對(duì)大家有所幫助。
實(shí)驗(yàn)原理：
根據(jù)成熟雌蟾蜍體內(nèi)含大量卵細(xì)胞且可以方便獲取，細(xì)胞內(nèi)含核酸豐富，沒有其它組織器官等的干擾等優(yōu)點(diǎn)以確定蟾蜍卵細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)所需的真核細(xì)胞。通過TRIZOL溶液中變性劑破碎真核細(xì)胞，然后經(jīng)過氯仿等有機(jī)溶劑抽提RNA，再利用RNA不溶于異丙醇的性質(zhì)將自身析出，達(dá)到分離提純的目的。
TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的`蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì)，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來(lái)抑制內(nèi)源和外源RNase（RNA酶）。0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯(lián)合使用可增強(qiáng)抑制作用。異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)消失，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)降解，核蛋白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。
甲基綠―吡羅紅為堿性染料，它分別能與細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA結(jié)合呈現(xiàn)不同顏色。當(dāng)甲基綠與吡羅紅作為混合染料時(shí)，甲基綠與染色質(zhì)中DNA選擇性結(jié)合顯示綠色或藍(lán)色；吡羅紅與核仁、細(xì)胞質(zhì)中的RNA選擇性結(jié)合顯示紅色。其原因可能是兩種染料的混合染液中有競(jìng)爭(zhēng)作用，同時(shí)兩種核酸分子都是多聚體，而其聚合程度有所不同。甲基綠易與聚合程度高的DNA結(jié)合呈現(xiàn)綠色。而吡羅紅則與聚合程度較低的RNA結(jié)合呈現(xiàn)紅色（但解聚的DNA也能和派洛寧結(jié)合呈現(xiàn)紅色）。即RNA對(duì)派洛寧親和力大，被染成紅色，而DNA對(duì)甲基綠親和力大，被染成綠色。09419
實(shí)驗(yàn)材料：
�。ㄒ唬┰噭�
甲基綠―吡羅紅染料：①染色劑A液的兩種配制方法
第一種方法：取吡羅紅甲基綠粉1g，加入到100mL蒸餾水中溶解，然后用濾紙過濾，將濾液放入棕色瓶中備用。
第二種方法：取甲基綠2g溶于98mL蒸餾水中，取吡羅紅G5g溶于95mL蒸餾水中。取6mL甲基綠溶液和2mL吡羅紅溶液加入到16mL蒸餾水中，即為A液，放入棕色瓶中備用。（注意：用于核酸染色的是吡羅紅G，請(qǐng)不要錯(cuò)買吡羅紅B。）
�、谌旧珓〣液的配制方法B液是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4g，用蒸餾水溶解至1000mL備用；再取乙酸12mL，用蒸餾水稀釋至1000mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30mL和稀釋的乙酸20mL，加蒸餾水50mL，配成pH為4.8的B液（緩沖液）。
�、廴旧珓┑呐渲迫旧珓┦怯葾液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合，就是實(shí)驗(yàn)中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應(yīng)該注意的是該試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.TRIZOL試劑（Invitrogen公司購(gòu)買）
3.75%乙醇
4.氯仿
5.異丙醇
6.Nacl(0.14m/l)
�。ǘ┢鞑�
1.離心機(jī)（3000r.p.m）
2.冰浴
3．研缽
4.燒杯
5.量筒
6.試管
7.玻棒
8.膠頭滴管
9.離心管
10.天平
實(shí)驗(yàn)方法：
制備勻漿：
以班級(jí)為單位，稱取大概10g蟾蜍卵細(xì)胞（2~3℃保存），于研缽（可置于冰浴鍋上）中，根據(jù)10~30mg組織細(xì)胞加1mltrizol試劑的量加入其中，快速研磨，制備勻漿。實(shí)驗(yàn)二人合作為一組，每組取大概10ml勻漿。
RNA的提�。�
取回勻漿后，室溫靜置10min，使樣品充分裂解――離心(3000r.p.s)20mins――取上清液移至新的離心管――加1/5TRIZOL溶液體積氯仿――在手中反復(fù)振蕩搖勻，室溫靜置10min。――離心20mins――取上清液――在上清中加入等體積冰冷的異丙醇，室溫放置10min。――充分混勻，靜置10minute――離心20min――沉淀用75%乙醇洗滌兩次
定性試驗(yàn)：
取2支干凈試管，一管加入1.5MLRNA溶液（將RNA顆粒狀的沉淀溶于
2ML0.14/NACL溶液中），另一管加入蒸餾水1.5ML,像兩管中加入3M甲基綠-吡羅紅染色劑，溶液變成紅色為陽(yáng)性反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
利用TRIZOL法可成功提取的RNA，并使得甲基綠-吡羅紅染色劑顯紅色。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
TRIzol對(duì)人體有害，使用時(shí)應(yīng)戴一次性手套，注意防止濺出。
由于本科生實(shí)驗(yàn)室里的為普通離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不高，故可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。
離心后，注意上清液和沉淀的取舍以及對(duì)RNA層的小心吸取，否則將導(dǎo)致RNA樣品中有DNA污染。
【DNA的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)報(bào)告】相關(guān)文章：
科技實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告08-05