葡萄病毒B的RT-PCR檢測(cè)技術(shù)研究

旨在建立適合葡萄的葡萄病毒B的RT-PCR檢測(cè)技術(shù).從感染葡萄病毒B的葡萄皮層中提取總RNA,以其為模板合成cDNA第一鏈,并利用兩對(duì)引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增;回收PCR特異擴(kuò)增產(chǎn)物,與pUCm-T載體連接,并進(jìn)行轉(zhuǎn)化、重組克隆的篩選、重組質(zhì)粒的酶切鑒定和序列測(cè)定.結(jié)果顯示,兩對(duì)引物均能獲得與預(yù)期片段大小一致長(zhǎng)約460 bp和470 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)增片段序列與已報(bào)道GVB序列(序列號(hào):X75448)的核苷酸同源性均為81%,經(jīng)反復(fù)多次試驗(yàn)證實(shí),利用總RNA為模板合成cDNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)GVB是準(zhǔn)確、可靠的.

作 者： 楊相昆 田海燕 牛建新 王林 代永欣   作者單位： 楊相昆(石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院園藝系,石河子,832003;新疆兵團(tuán)綠洲生態(tài)農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子,832003;新疆農(nóng)墾科學(xué)院,石河子,832003)

田海燕(新疆兵團(tuán)綠洲生態(tài)農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子,832003;新疆農(nóng)墾科學(xué)院,石河子,832003)

牛建新,王林,代永欣(石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院園藝系,石河子,832003;新疆兵團(tuán)綠洲生態(tài)農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子,832003) 

刊 名： 生物技術(shù)通報(bào)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2010 ""(5)  分類號(hào)：   關(guān)鍵詞： 葡萄病毒B   檢測(cè)   重組質(zhì)粒   序列   同源性  

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