擬南芥鈣調(diào)素結(jié)合蛋白cDNA克隆的分離和初步鑒定

以生物素標(biāo)記的鈣調(diào)素為探針,從擬南芥(Arabidopsis thaliana)λZAPⅡ cDNA表達(dá)文庫中分離到9個(gè)陽性克隆.融合蛋白經(jīng)CaM-gel overlay分析,其中Y1編碼的融合蛋白在1 mmol/L Ca2+存在下與膠體金標(biāo)記的鈣調(diào)素有明顯結(jié)合.序列測(cè)定結(jié)果顯示其外源片段全長(zhǎng)為726 bp,含有一個(gè)476 bp的開放閱讀框.GenBank數(shù)據(jù)庫搜索及同源性分析結(jié)果表明該序列為擬南芥1號(hào)染色體基因組5 661～7 013序列,編碼一未知蛋白,但與真核生物翻譯起始因子5A(eIF-5A)具87%的同源性,并具相似的分子量、等電點(diǎn)和相同的保守序列.與eIF-5A的結(jié)構(gòu)特征比較,可初步確定Y1編碼的蛋白為真核生物翻譯起始因子5A家族中的新成員.即擬南芥1號(hào)染色體5 661～7 013序列為一尚未報(bào)道的翻譯起始因子基因.蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)其C-端122～135氨基酸殘基處有一雙親α-螺旋結(jié)構(gòu),這一結(jié)構(gòu)與大多數(shù)鈣調(diào)素結(jié)合蛋白中的鈣調(diào)素結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特征一致.該序列已提交NCBI BankIt數(shù)據(jù)庫,登錄號(hào)為AF492850.

作 者： 詹紅利 李翠風(fēng) 祁倩 李國(guó)亮 凌啟閬 Zhan Hongli Li Cuifeng Qi Qian Li Guoliang Ling Qilang   作者單位： 南開大學(xué),生物化學(xué)與分子生物學(xué)系,天津,300071  刊 名： 南開大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS NANKAIENSIS  年，卷(期)： 2006 39(3)  分類號(hào)： Q75  關(guān)鍵詞： 鈣調(diào)素結(jié)構(gòu)蛋白   真核生物翻譯起始因子5A(eIF-5A)   表達(dá)文庫篩選  

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