抑制差減雜交法克隆牙鲆變態(tài)早期差異表達(dá)的基因

為了克隆變態(tài)早期牙鲆頭部差異表達(dá)的基因,采用抑制差減雜交法,以變態(tài)前的仔魚(yú)頭部表達(dá)的RNA作為驅(qū)動(dòng)RNA,建立了牙鲆變態(tài)早期的差減cDNA文庫(kù),并利用相對(duì)定量RT-PCR對(duì)其進(jìn)行了篩選.差減庫(kù)的平均插入片段558 bp左右,陽(yáng)性率為81.8%.隨機(jī)測(cè)定的45個(gè)克隆,在剔除假陽(yáng)性克隆后,共得到22個(gè)不同的基因,其中13個(gè)為已知cDNA的同源基因,而另外9個(gè)為已知蛋白的同源基因,分別為prolactin receptor-like,COL1A1,M3-muscarinic receptor,Sfrs3,tropomyosin,ribosomal protein L27,ribosomal protein S12,GAPDH,COL1A3.在所有22個(gè)基因中,COL1A1基因在差減庫(kù)中的分布頻率最高,為22.2%.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,在所檢測(cè)的11個(gè)基因中,所有基因在右眼移動(dòng)前后的牙鲆頭部均有表達(dá),只是體現(xiàn)在表達(dá)水平上的不同.

作 者： 鮑寶龍 楊桂梅 施志儀 任大明 BAO Bao-long YANG Gui-mei SHI Zhi-yi REN Da-ming   作者單位： 鮑寶龍,BAO Bao-long(上海水產(chǎn)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,上海,200090;復(fù)旦大學(xué)遺傳工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200433)

楊桂梅,施志儀,YANG Gui-mei,SHI Zhi-yi(上海水產(chǎn)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,上海,200090)

任大明,REN Da-ming(復(fù)旦大學(xué)遺傳工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200433) 

刊 名： 水產(chǎn)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA  年，卷(期)： 2006 30(2)  分類(lèi)號(hào)： Q344+.13 S917  關(guān)鍵詞： 抑制差減雜交   牙鲆   變態(tài)早期   變態(tài)前   差異表達(dá)   相對(duì)定量RT-PCR  

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