豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白在乳酸菌中的表達(dá)

目的:構(gòu)建豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)重組乳酸乳球菌,確定其最佳表達(dá)條件,為重組乳酸菌作為口服疫苗防治豬傳染性胃腸炎奠定基礎(chǔ).方法:根據(jù)豬傳染性胃腸炎病毒纖突(S)蛋白的全基因序列及表達(dá)載體質(zhì)粒的基因融合特點(diǎn),設(shè)計(jì)一對(duì)引物,進(jìn)行PCR,獲得含有TGEV S基因4個(gè)主要抗原位點(diǎn)的約2000bp目的片段,將其與表達(dá)載體質(zhì)粒pNZ8048進(jìn)行連接,通過(guò)電轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000細(xì)胞內(nèi),在乳鏈菌肽(Nisin)的誘導(dǎo)下進(jìn)行表達(dá),確定最佳表達(dá)條件;并通過(guò)SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)和Western-blot分析表達(dá)蛋白活性.結(jié)果:成功獲得了TGEV S蛋白在乳酸乳球菌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)并且表達(dá)的蛋白具有TGE全病毒的抗原性.確定了乳酸乳球菌表達(dá)TGEV S蛋白的最佳表達(dá)條件為在以1ng/ml的乳鏈桿菌肽nisin誘導(dǎo)下,誘導(dǎo)后3h,重組蛋白表達(dá)效率達(dá)最高,重組蛋白約占菌體總蛋白含量的8.7%.結(jié)論:在乳酸乳球菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的重組TGEV S蛋白獲得了理想表達(dá),為進(jìn)一步研制開(kāi)發(fā)防治TGE口服疫苗提供物質(zhì)基礎(chǔ).

作 者： 唐麗杰 歐笛 王榮軍 徐義剛 鐘濤 李一經(jīng) TANG Li-jie OU Di WANG Rong-jun XU Yi-gang ZHONG Tao LI Yi-jing   作者單位： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué),黑龍江,哈爾濱,150030  刊 名： 生物技術(shù)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2007 17(6)  分類號(hào)： Q933  關(guān)鍵詞： TGEV S蛋白   乳酸菌   表達(dá)及分析  

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