內(nèi)毒素結(jié)合肽的改良、原核表達(dá)及純化

目的:對(duì)人內(nèi)毒素結(jié)合肽(endotoxin binding peptide,EBP)進(jìn)行改良,獲得突變體mEBP(mutate of endotoxin binding peptide,mEBP)基因并進(jìn)行原核表達(dá),純化獲得高純度的mEBP.方法:應(yīng)用PCR定點(diǎn)誘變方法獲得mEBP基因,構(gòu)建PinpointXa-3/mEBP融合表達(dá)載體,在BL21(DE3)pLysS宿主菌進(jìn)行表達(dá),溶菌酶裂解法提取包涵體,融合蛋白經(jīng)PinpointTMXa純化后,由factorXa酶切,獲得目的肽,RP-HPLC純化獲得高純度的mEBP.結(jié)果:應(yīng)用PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)完成了EBP第5,18位谷氨酰胺→賴氨酸的定點(diǎn)突變,且通過原核表達(dá),色譜純化獲得了高純度的mEBP.結(jié)論:成功獲得高純度的mEBP,為下一步的抗內(nèi)毒素功能檢測(cè)奠定基礎(chǔ).

作 者： 孫亞麗 劉友生 楊海捷 SUN Ya-li LIU You-sheng YANG Hai-jie   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院病理研究所,重慶,400038  刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(3)  分類號(hào)： Q81  關(guān)鍵詞： 內(nèi)毒素結(jié)合肽   突變   表達(dá)   純化  

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