小鼠AMCase基因突變體的cDNA克隆及序列分析

目的克隆小鼠酸性哺乳動物幾丁質(zhì)酶(AMCase),并進(jìn)行序列分析.方法從BALB/c小鼠胃組織中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,運用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增獲得AMCase基因,構(gòu)建pMD18-T/AMCase重組載體,測序后應(yīng)用DNAMAN 4.0軟件與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比較,并通過SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服務(wù)器對等電點、氨基酸組成、信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)等特征進(jìn)行分析.結(jié)果所克隆基因共編碼473個氨基酸,分子量為51.93kD,等電點為4.73,與AMCase同源性達(dá)99.57%,同屬18家族的幾丁質(zhì)酶成員,由信號肽(氨基酸1～21)、催化區(qū)(氨基酸22～391)、鉸鏈區(qū)(氨基酸392～425)和結(jié)合區(qū)(氨基酸426～473)組成.編碼的蛋白質(zhì)在催化區(qū)和鉸鏈區(qū)分別發(fā)生了突變,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突變?yōu)镻ro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(蘇氨酸)突變?yōu)镾er(絲氨酸).結(jié)論所克隆的基因為AMCase的一個突變體,其相關(guān)生物學(xué)信息的明確,為今后運用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)一步深入研究其作用奠定了基礎(chǔ).

作 者： 陳凌 沈柱 劉玉峰 劉斌 劉瑛   作者單位： 710032,西安,第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科  刊 名： 解放軍醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY  年，卷(期)： 2006 31(3)  分類號： Q781  關(guān)鍵詞： 酸性哺乳動物幾丁質(zhì)酶   突變體   序列分析,DNA  

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