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意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在桿狀病毒-昆蟲細胞系統(tǒng)中的表達
利用Bac to Bac系統(tǒng)將意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再將其轉(zhuǎn)化入含穿梭載體Bacmid的受體大腸桿菌DH10Bac中,通過轉(zhuǎn)座作用,得到含AmPLA2基因的重組病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因組DNA,用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染粉紋夜蛾細胞Tn-5B1-4,得到重組病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重組病毒感染Tn-5B1-4細胞,在細胞中表達AmPLA2.SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,與6×His Tag融合表達的產(chǎn)物蛋白分子量約為18 kD左右,表達量約占細胞總蛋白的5.35%.Western blot印跡顯示,融合表達產(chǎn)物能與意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清發(fā)生免疫反應(yīng).生物活性測定顯示,含表達產(chǎn)物的細胞蛋白粗提物對底物蛋黃的酶活力約為6.13 μmol·min-1·mg-1.
邢麗蘋,張傳溪,程家安,XING Li-Ping,ZHANG Chuan-Xi,CHENG Jia-An(浙江大學(xué)應(yīng)用昆蟲學(xué)研究所,杭州,310029)
刊 名： 昆蟲學(xué)報 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 49(3) 分類號： Q966 關(guān)鍵詞： 意大利蜜蜂 蜂毒 磷脂酶A2基因 桿狀病毒-昆蟲細胞系統(tǒng) 表達【意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在桿狀病毒-昆蟲細胞系統(tǒng)中的表達】相關(guān)文章：
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