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2種氣管黏膜上皮細胞體外培養(yǎng)技術的研究
目的 為以豬氣管黏膜上皮為細胞模型的研究奠定物質(zhì)基礎,進一步探討豬氣管黏膜上皮細胞的體外傳統(tǒng)培養(yǎng)和氣液界面培養(yǎng)技術,從而使2種培養(yǎng)技術優(yōu)勢互補.方法 對豬氣管上皮分離、純化、培養(yǎng)和傳代,并探索上皮細胞最佳凍存復蘇條件;復蘇后的氣管上皮細胞進行氣液界面培養(yǎng),繪制細胞生長曲線和觀察細胞纖毛生發(fā)情況.利用免疫組化法鑒定上皮細胞.結(jié)果 4步純化法可以得到高純度的氣管上皮細胞.使用胎牛血清、DMEM/F12培養(yǎng)液和DMSO的體積分數(shù)為50%、40%和10%的凍存體系保存的氣管上皮,復蘇后細胞存活率平均可達89%.優(yōu)化后的傳統(tǒng)方式培養(yǎng)的上皮細胞可連續(xù)傳代到第8代,但從第2代開始便觀察不到纖毛,轉(zhuǎn)換成氣液界面連續(xù)培養(yǎng)2代后重新生發(fā)纖毛,細胞存活期延長.免疫組化結(jié)果顯示分離培養(yǎng)細胞為上皮細胞.結(jié)論 成功建立了2種豬氣管上皮細胞培養(yǎng)技術,并找到適宜的氣管上皮細胞凍存條件,節(jié)省了不斷原代取材的成本和時間,并成功實現(xiàn)傳統(tǒng)培養(yǎng)細胞凍存復蘇后很快適應氣液界面的培養(yǎng)并恢復細胞的天然結(jié)構(gòu),為豬氣管黏膜上皮相關研究提供豐富的細胞來源.
張彥明,ZHANG Yan-ming(西北農(nóng)林科技大學動醫(yī)學院,陜西,楊陵,712100)
魏建忠,李郁,王桂軍,WEI Jian-zhong,LI Yu,WANG Gui-jun(安徽農(nóng)業(yè)大學,動物科技學院,安徽,合肥,230036)
何長生,王非,HE Chang-sheng,WANG Fei(安徽省動物疫病預防與控制中心,安徽,合肥,230000)
刊 名： 中國微生態(tài)學雜志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY 年，卷(期)： 2010 22(2) 分類號： Q954.6-33~+2 關鍵詞： 豬氣管 上皮細胞 傳統(tǒng)培養(yǎng) 氣液界面培養(yǎng) 研究 Pig trachca-bronchia Epithelium Traditional culture Air-liquid culture Re-search【2種氣管黏膜上皮細胞體外培養(yǎng)技術的研究】相關文章：
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