釀酒酵母HOR2基因缺失突變株的構(gòu)建

目的:構(gòu)建釀酒酵母HOR2基因缺失的突變株并研究其對(duì)甘油和乙醇產(chǎn)造的影響.方法:以PCR為基礎(chǔ),通過(guò)同源重組的方式使目的基因缺失.結(jié)果:通過(guò)設(shè)計(jì)含有與HOR2(GPP2)基因兩側(cè)序列同源的長(zhǎng)引物,以質(zhì)粒PUG6為模板進(jìn)行PCR構(gòu)建含有Cre/loxP系統(tǒng)的釀酒酵母HOR2基因敲除組件,轉(zhuǎn)化釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS,獲得為loxP-kan-loxP序列組件所替換而產(chǎn)生kan'的陽(yáng)性克隆子.然后再將質(zhì)粒PSH65轉(zhuǎn)入陽(yáng)性克隆子誘導(dǎo)表達(dá)Cre酶切除篩選標(biāo)記,在原ORF基因處保留一個(gè)loxP位點(diǎn),丟失質(zhì)粒后獲得HOR2單倍體缺陷型菌株.重復(fù)轉(zhuǎn)化敲除組件實(shí)現(xiàn)另一條等位基因的敲除.發(fā)酵實(shí)驗(yàn)表明,突變株甘油產(chǎn)量降低3.34%,乙醇產(chǎn)量提高1.96%.結(jié)論:成功獲得了釀酒酵母HOR2基因缺失的突變株,并命名為YS_2-HOR2.

作 者： 陳永金 林曉華 王艷尊 雷娟娟 黃建忠   作者單位： 福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,工業(yè)微生物教育部工程研究中心,福建現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)工程研究中心,福建福州350108  刊 名： 生物技術(shù)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 20(2)  分類(lèi)號(hào)： Q785  關(guān)鍵詞： 釀酒酵母   HOR2基因   基因敲除   乙醇   甘油   Saccharomyces cerevisiae   HOR2 gene   gene knockout   ethanol   glycerol  

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