體外誘導鼠胚胎干細胞向心肌細胞分化的實驗研究

目的:探討小鼠胚胎干細胞(ESCs)在轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)聯(lián)合內(nèi)臟內(nèi)胚層END-2細胞共培養(yǎng)誘導條件下分化為心肌細胞的特征.方法:小鼠胚胎干細胞在小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)飼養(yǎng)層上增殖培養(yǎng),先將ESCs懸浮培養(yǎng)形成2-3 d的擬胚體(EBs ),再將2-3 d EBs種植到含有TGF-β1的24孔板中進行誘導,以及種植到鋪有END-2細胞飼養(yǎng)層的24孔板中進行誘導,培養(yǎng)液中同時加入TGF-β1. 免疫細胞熒光技術(shù)檢測心肌細胞特異性肌動蛋白(α-Actin)及肌鈣蛋白T(TnT)的表達,透射電鏡觀察分化心肌細胞的超微結(jié)構(gòu).流式細胞儀檢測EBs集落心肌細胞的平均分化率.結(jié)果:TGF-β1誘導組和TGF-β1聯(lián)合內(nèi)臟內(nèi)胚層END-2細胞共培養(yǎng)誘導組分別有43%,91%(P＜0.05)的擬胚體出現(xiàn)自發(fā)節(jié)律性收縮,均表達心肌細胞特異性蛋白α-Actin和TnT,以及觀察到心肌樣超微結(jié)構(gòu),但在共培養(yǎng)的條件下,自發(fā)節(jié)律性收縮區(qū)域較大,且細胞形態(tài)較單一.兩誘導組EBs集落心肌細胞平均分化率分別是35%,74%(P＜0.05).結(jié)論:TGF-β1聯(lián)合內(nèi)臟內(nèi)胚層END-2細胞共培養(yǎng)對小鼠ESCs向心肌細胞定向分化有協(xié)同作用,具有較高的誘導分化率.

作 者： 曾彬 林國生 羅浩 蔡軍 ZENG Bin LIN Guosheng LUO Hao CAI Jun   作者單位： 武漢大學人民醫(yī)院心血管內(nèi)科,武漢,430060  刊 名： 武漢大學學報（醫(yī)學版）  ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 27(2)  分類號： Q813.1+1  關(guān)鍵詞： END-2細胞   胚胎干細胞   心肌細胞   共培養(yǎng)   分化  

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