蚯蚓纖溶酶(EFE-3D)基因的合成及其在畢赤酵母中的表達(dá)

選擇畢赤酵母偏愛密碼子,分成32個(gè)長約48 bp且相互配對的寡核苷酸片段,合成蚯蚓纖溶酶基因EFE-3D.寡核苷酸片段經(jīng)5'磷酸化后,通過錯(cuò)位拼接,PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))一次性完成新基因的合成并且克隆至載體pPIC9K中.最后利用電穿孔法將新基因克隆至畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),用免疫印記法檢測表達(dá)產(chǎn)物,最后利用纖維平板確定其表達(dá)產(chǎn)物的活性為3 500 mm2/mL,1 L發(fā)酵液相當(dāng)于48 mg天然蚯蚓纖溶酶活性.

作 者： 秦奕輝 儲(chǔ)炬 黃文華 莊英萍 張嗣良 QIN Yi-hui CHU Ju HUANG Wen-hua ZHUANG Ying-ping ZHANG Si-liang   作者單位： 秦奕輝,儲(chǔ)炬,莊英萍,張嗣良,QIN Yi-hui,CHU Ju,ZHUANG Ying-ping,ZHANG Si-liang(華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200237)

黃文華,HUANG Wen-hua(上海國源生物技術(shù)有限公司,上海,200233) 

刊 名： 華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 32(4)  分類號(hào)： Q55  關(guān)鍵詞： 畢赤酵母   蚯蚓纖溶酶   基因合成   密碼子偏好性  

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