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人防御素-5基因的克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
目的 對(duì)人防御素5(HD-5)基因進(jìn)行克隆,構(gòu)建真核表達(dá)載體HD5-pPICZαA.方法 從人cDNA文庫(kù)中PCR擴(kuò)增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分別雙酶切HD-5基因擴(kuò)增產(chǎn)物和畢赤酵母表達(dá)載體pPICZαA,用T4DNA連接酶連接目的 基因片段和pPICZαA,然后轉(zhuǎn)化到E.coil Top10中,Zeocin篩選轉(zhuǎn)化子并進(jìn)行PCR、酶切和序列鑒定.結(jié)果 提取陽(yáng)性克隆的重組質(zhì)粒,EeoR I和xba I雙酶切后跑電泳獲得預(yù)期條帶;同時(shí)重組質(zhì)粒經(jīng)序列測(cè)定,證實(shí)HD-5基因正確插入pPICZαA中,插入位置、方向均正確.結(jié)論 成功構(gòu)建人防御素5基因的真核表達(dá)載體HD5-pPICZαA,為HD-5蛋白的真核真核表達(dá)奠定基礎(chǔ).
作 者： 陸航 李華 吳學(xué)敏 單穎 作者單位： 陸航(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院普外科,遼寧錦州,121000)李華(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤科,遼寧錦州,121000)
吳學(xué)敏,單穎(遼寧醫(yī)學(xué)院免疫與病原生物學(xué)教研室,遼寧錦州,121000)
刊 名： 解剖科學(xué)進(jìn)展 ISTIC 英文刊名： PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES 年，卷(期)： 2010 16(3) 分類(lèi)號(hào)： Q782 關(guān)鍵詞： 人防御素-5 克隆 表達(dá)載體 畢赤酵母【人防御素-5基因的克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建】相關(guān)文章：
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