胸腺素α原基因的克隆及在大腸桿菌中的融合表達(dá)

胸腺素α原(ProTα)作為一種免疫增強(qiáng)劑,對(duì)各種免疫缺陷疾病、病毒感染以及腫瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作為核蛋白參與細(xì)胞增殖,在腫瘤的預(yù)測(cè)、診斷及治療中有一定應(yīng)用.根據(jù)人胸腺素α原已發(fā)表的核苷酸序列,設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物(P1/P2),應(yīng)用RT-PCR法從中國(guó)人外周血中克隆到ProTα基因,將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pMD18-T載體中并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,篩選陽(yáng)性重組質(zhì)粒進(jìn)行序列測(cè)定;同時(shí)用EcoRI和BamHI雙酶切PCR產(chǎn)物,將該基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的質(zhì)粒pGEX 6P-1中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá).結(jié)果表明,克隆到的ProTα基因與參考的氨基酸同源性為99.70%;原核表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳分析,融合蛋白分子量為37 ku,主要以可溶形式存在.

作 者： 李俊燕 周克夫 LI Jun-yan ZHOU Ke-fu   作者單位： 廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,細(xì)胞生物學(xué)與腫瘤細(xì)胞工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建,廈門(mén),361005  刊 名： 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 45(5)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 胸腺素α原   克隆   融合表達(dá)  

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