磁珠富集法與小片段克隆法篩選鯉微衛(wèi)星的比較研究

用2種方法克隆黑龍江鯉(Cyprinus (Cyprinus) carpio haematopterus)的微衛(wèi)星序列.這2種方法分別是:①經(jīng)典的小片段DNA克隆庫,用末端標(biāo)記的[γ-32] ATP的CA重復(fù)序列為探針篩選;②將酶切獲得的小片段DNA用結(jié)合有磁珠的并連接有15個CA重復(fù)序列的生物素進(jìn)行富集,獲得的含有CA重復(fù)的DNA片段并經(jīng)過兩次PCR擴增再克隆的方法獲得富集微衛(wèi)星片段的克隆庫.從前一個方法的克隆庫中篩選2000個菌落,獲得陽性克隆45個,有22個含有微衛(wèi)星,完美型的占63.6%,非完美型的占22.7%,混合型的占13.7%,重復(fù)次數(shù)超過10的有9個,占40.9%;從方法②的克隆庫中篩選2600個菌落,獲得陽性克隆1300個,測序其中的390個克隆,微衛(wèi)星314個,完美型的占79.0%;非完美型的占14.3%;混合型的占6.7%,重復(fù)次數(shù)超過10的有293個,占93.3%.結(jié)果表明,用生物素結(jié)合磁珠富集法克隆微衛(wèi)星效率高,成本低,所獲微衛(wèi)星質(zhì)量高,是一種值得推薦的微衛(wèi)星制備方法.

作 者： 孫效文 賈智英 魏東旺 魯翠云 梁利群 SUN Xiao-wen JIA Zhi-ying WEI Dong-wang LU Cui-yun LIANG Li-Qun   作者單位： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院,黑龍江水產(chǎn)研究所,黑龍江,哈爾濱,150070  刊 名： 中國水產(chǎn)科學(xué)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA  年，卷(期)： 2005 12(2)  分類號： Q959.468  關(guān)鍵詞： 磁珠富集   小片段克隆   鯉   微衛(wèi)星  

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