Tau融合蛋白及其缺失突變體與朊蛋白的體外作用分析

在部分朊病毒病(prion diseases)中,高度磷酸化的微管相關(guān)蛋白tau與朊蛋白(prion protein,PrP)發(fā)生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理機(jī)制中有重要作用.本室已經(jīng)證明二者可以發(fā)生分子間相互作用,本文進(jìn)一步分析了tau蛋白與prion的體外相互作用及作用位點(diǎn).利用RT-PCR方法從人源細(xì)胞系SH-SY5Y cDNA中擴(kuò)增出微管相關(guān)蛋白tau全長cDNA序列,克隆至質(zhì)粒pGEX-2T載體,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白GST-tau.利用GST pull-down及免疫共沉淀方法檢測全長tau蛋白與PrP23-231的分子間相互作用.進(jìn)一步表達(dá)tau蛋白的各種缺失突變體,確定tau蛋白與PrP蛋白的相互作用位點(diǎn).結(jié)果表明,所表達(dá)的全長tau蛋白及各種缺失突變體均為可溶性蛋白,Western印跡結(jié)果顯示,各種蛋白均能很好的被tau蛋白單抗識(shí)別.GST pull-down和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)均顯示,原核表達(dá)的全長tau蛋白可與全長的PrP蛋白在體外發(fā)生相互作用,并確定相互作用位點(diǎn)位于tau蛋白的N端序列及中段的重復(fù)區(qū).上述結(jié)果為研究tau蛋白與PrP的相互作用在朊病毒病的發(fā)病機(jī)制中的意義提供了一定的理論基礎(chǔ).

作 者： 王小凡 韓俊 董辰方 韓露 萬言珍 李鋒 安潤 董小平 WANG Xiao-Fan HAN Jun DONG Chen-Fang HAN Lu WAN Yan-Zhen LI Feng AN Run DONG Xiao-Ping   作者單位： 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所,傳染病預(yù)防控制國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100052  刊 名： 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分類號： Q5  關(guān)鍵詞： 微管相關(guān)蛋白tau   朊蛋白   分子間相互作用  

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