卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒編碼IL-6基因的分離克隆及在NIH3T3細(xì)胞中的表達(dá)研究

目的:分離克隆卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)編碼IL-6基因(vIL-6),并導(dǎo)入NIH3T3細(xì)胞中進(jìn)行真核表達(dá).方法:根據(jù)KSHV編碼IL-6基因核苷酸序列設(shè)計(jì)一對引物,在引物的5'端分別引入BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位點(diǎn),以原發(fā)性滲出性淋巴瘤(PEL)細(xì)胞系BCBL-1細(xì)胞總DNA為模板,PCR擴(kuò)增vIL-6基因,PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切克隆進(jìn)真核載體pcDNA3.1(+).進(jìn)一步在原有的下游引物5'端加上一段flag序列,以經(jīng)過序列測定正確的重組質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增vIL-6-flag融合基因,構(gòu)建含vIL-6-flag的重組質(zhì)粒.將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲細(xì)胞抗性克隆.最后用抗flag M2單克隆抗體進(jìn)行Western blot檢測vIL-6在NIH3T3細(xì)胞中的表達(dá).結(jié)果:獲得vIL-6-flag融合基因,全長671 bp,其中vIL-6基因核苷酸序列與GenBank中所登記的KSHV vIL-6基因呈現(xiàn)100%同源性.Western blot結(jié)果顯示,在約25 ku位置有目的條帶,與預(yù)期的重組vIL-6-flag融合蛋白大小一致.結(jié)論:KSHV vIL-6編碼基因在NIH3T3細(xì)胞中初步獲得表達(dá).

作 者： 陳秀英 盧春 程林 曾怡 姚水洪 秦娣 CHEN Xiu-ying LU Chun CHENG Lin ZENG Yi YAO Shui-hong QIN Di   作者單位： 南京醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)系,江蘇,南京,210029  刊 名： 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING  年，卷(期)： 2006 26(10)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒   病毒編碼IL-6   flag序列   真核表達(dá)  

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