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人β干擾素-血清白蛋白融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達

時間:2023-04-28 16:01:09 生物醫(yī)學(xué)論文 我要投稿
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人β干擾素-血清白蛋白融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達

利用重疊PCR技術(shù)在體外拼接IFNβ和HSA基因,將得到的融合基因插入到畢赤酵母分泌型表達載體pPIC9K中,置于啟動子AOX1和α交配因子信號肽的作用下,分泌表達融合蛋白IFNβ-HSA.重組質(zhì)粒pPIC9K-IFNβ-HSA經(jīng)SalI線性化,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母KM71,經(jīng)G418篩選得到高拷貝轉(zhuǎn)化子.PCR鑒定后,用甲醇誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE和Western blot分析表達的融合蛋白IFNβ-HSA,表明該蛋白分子量約為90kDa,且具有HSA的抗原性;用細(xì)胞病變抑制法測定發(fā)酵液上清中融合蛋白的干擾素活性約為640IU/ml.

作 者:   作者單位:   刊 名: 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名: CHINA BIOTECHNOLOGY  年,卷(期): 2006 26(7)  分類號: Q786  關(guān)鍵詞: β干擾素   巴斯德畢赤酵母   融合蛋白  

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