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重組逆轉(zhuǎn)錄病毒雙表達載體的構(gòu)建及其對K562細胞增殖活性的影響
目的 構(gòu)建針對慢性粒細胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的雙表達逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,初步探討其對K562細胞表型的影響.方法 以逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMSCV-neo為骨架,構(gòu)建eGFP及針對bcr-abl b3a2型mRNA的反義RNA雙表達載體pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同時構(gòu)建對照載體pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及測序鑒定各重組載體;以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染各載體到PT67包裝細胞后,G418篩選穩(wěn)定的病毒產(chǎn)生細胞株,再以NIH3T3細胞測定病毒滴度并感染K562細胞,計數(shù)細胞數(shù)繪制細胞生長曲線,FCM檢測細胞凋亡情況、并用Western blot檢測PKR激活情況.結(jié)果 酶切及測序結(jié)果證實各重組載體構(gòu)建完全正確;G418篩選到高滴度重組逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染組K562細胞生長受抑制,其24 h時早期細胞凋亡率為22.54±3.19%,與除PT67-80as組外的其余各組相比有顯著差異(P＜0.05);PT67-40as和PT67-80as處理組細胞PKR磷酸化水平分別增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用.結(jié)論 成功構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒雙表達載體,并發(fā)現(xiàn)其能抑制K562細胞生長并引起細胞凋亡,通過激活PKR抗腫瘤可望成為腫瘤新的靶向治療策略.
作 者： 曾建明 馮文莉 王小中 趙世巧 白衛(wèi)君 羅云萍 溫健萍 涂植光 黃宗干 ZENG Jian-ming FENG Wen-li WANG Xiao-zhong ZHAO Shi-qiao BAI Wei-jun LUO Yun-ping WEN Jian-ping TU Zhi-guang HUANG Zong-gan 作者單位： 曾建明,馮文莉,王小中,趙世巧,白衛(wèi)君,羅云萍,ZENG Jian-ming,FENG Wen-li,WANG Xiao-zhong,ZHAO Shi-qiao,BAI Wei-jun,LUO Yun-ping(重慶醫(yī)科大學臨床血液學教研室,臨床檢驗診斷學省部共建教育部重點實驗室,重慶,400016)溫健萍,WEN Jian-ping(Canadian Blood Services,Hamilton,ON L8S 1H8 Canada)
涂植光,TU Zhi-guang(重慶醫(yī)科大學臨床生物化學教研室,重慶,400016)
黃宗干,HUANG Zong-gan(重慶醫(yī)科大學臨床學院血液科,重慶,400016)
刊 名： 第三軍醫(yī)大學學報 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 2006 28(21) 分類號： Q782 R329.28 R733.722 關(guān)鍵詞： 慢性粒細胞白血病 PKR 反義RNA 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 基因克隆【重組逆轉(zhuǎn)錄病毒雙表達載體的構(gòu)建及其對K562細胞增殖活性的影響】相關(guān)文章：
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