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應(yīng)用PCR-酶切連接法合成全長sFat1基因
人工合成基因在生命科學(xué)研究中有著重要的意義,因此基因合成是一項常用技術(shù).長片段基因的合成比較困難,常常因為合成中堿基序列的錯配、突變等原因而導(dǎo)致失敗.研究者們所熟知的幾種現(xiàn)行的方法仍然難以解決該問題.本研究在作者自身的工作經(jīng)驗中建立了一種新的基因合成方法,即PCR-酶切連接法.應(yīng)用該方法成功地將化學(xué)合成的27個寡聚核苷酸片段(每個片段長60～68 bp)拼接組裝起來,獲得了完整的總長為1 226 bp的基因sFat-1.整個過程僅采用3輪PCR(共7個反應(yīng))、2輪的酶切連接(3個反應(yīng)),而且未曾出現(xiàn)任何偏離預(yù)期基因序列的差錯.該方法步驟較少,技術(shù)簡單,出錯極少,是合成長基因序列很好的選擇.
作 者： 朱貴明 陳宏 盧建申 周艷榮 吳曉潔 陳紅星 鄧?yán)^先 ZHU Gui-Ming CHEN Hong LU Jian-Shen ZHOU Yan-Rong WU Xiao-Jie CHEN Hong-Xing DENG Ji-Xian 作者單位： 朱貴明,ZHU Gui-Ming(西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院,楊凌,712100;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071)陳宏,CHEN Hong(西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院,楊凌,712100;徐州師范大學(xué)細(xì)胞與分子生物學(xué)研究所,徐州,221116)
盧建申,周艷榮,吳曉潔,陳紅星,鄧?yán)^先,LU Jian-Shen,ZHOU Yan-Rong,WU Xiao-Jie,CHEN Hong-Xing,DENG Ji-Xian(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071)
刊 名： 遺傳 ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING) 年，卷(期)： 2006 28(9) 分類號： Q75 關(guān)鍵詞： 基因合成 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ω-3脂肪酸去飽和酶基因【應(yīng)用PCR-酶切連接法合成全長sFat1基因】相關(guān)文章：
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