人血清白蛋白-C肽融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達

目的構(gòu)建重組表達人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的畢赤酵母表達菌株.方法根據(jù)表達系統(tǒng)的密碼子偏好性優(yōu)化CP基因,酶切連接pBlue-HSA質(zhì)粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,將HSA-CP融合基因雙酶切后插入分泌表達栽體pPIC9K中,重組質(zhì)粒pPIC9K-HSA-CP經(jīng)SalⅠ線性化后,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115,表型篩選Mut+轉(zhuǎn)化子.PCR鑒定后,用甲醇誘導搖瓶分泌表達.結(jié)果融合基因約為1 900bp,序列測定正確.SDS-PAGE分析表明表達融合蛋白的相對分子量約為70kD,搖瓶培養(yǎng)表達量為140mg/L,Western blot鑒定顯示表達的融合蛋白為HSA和CP的雜合分子.結(jié)論實現(xiàn)了HSA-CP融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達,細胞活性研究顯示HSA-CP融合蛋白對人胚腎293細胞的生長具有一定的促進作用.

作 者： 周利蘋 張蓮芬 雷楗勇 張文婷 蔡燕飛 金堅 Zhou Liping Zhang Lianfen Lei Jianyong Zhang Wenting Cai Yanfei Jin Jian   作者單位： 江南大學醫(yī)藥學院分子藥理研究室,江南大學工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室,無錫,214122  刊 名： 生物技術(shù)通報  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2008 ""(3)  分類號： Q94  關鍵詞： C肽   人血清白蛋白   融合蛋白   畢赤酵母  

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