大鼠高親和力二羧酸轉(zhuǎn)運蛋白的克隆表達及細胞內(nèi)定位

目的:克隆大鼠高親和力鈉依賴二羧酸轉(zhuǎn)運蛋白(SDCT2)的全長cDNA,并明確其在腎小管上皮細胞內(nèi)的定位表達情況.方法:從大鼠腎組織中提取總RNA,用帶有8肽FLAG標簽的PCR引物通過RT-PCR技術(shù)擴增出SDCT2全長基因并測序,將其插入真核表達載體中構(gòu)建SDCT2真核表達載體,然后將它們轉(zhuǎn)染到腎小管上皮細胞LLC-PK1中表達,并用激光共聚焦顯微鏡觀察該蛋白的亞細胞定位情況.結(jié)果:擴增出2 kb的SDCT2全長基因,Westem blot表明SDCT2基因在LLC-PK1細胞中得到了正確的表達;共聚焦顯微鏡分析顯示正常SDCT2蛋白主要定位于細胞膜上,與生物信息學的預測結(jié)果一致;為了比較不同連接溫度對重組DNA連接效率的影響,觀察了3種連接溫度下的轉(zhuǎn)化效率,結(jié)果顯示溫度循環(huán)法的連接效率明顯比其他2種常規(guī)連接溫度要高.結(jié)論:高親和力鈉依賴二羧酸轉(zhuǎn)運蛋白全長基因被成功克隆,其主要表達于腎小管上皮細胞膜上.

作 者： 侯剴 白雪源 陳香美 馮哲 傅博 HOU Kai BAI Xue-Yuan CHEN Xiang-Mei FENG Zhe FU Bo   作者單位： 解放軍總醫(yī)院/軍醫(yī)進修學院,全軍腎臟病研究所,北京,100853  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78 Q735  關(guān)鍵詞： 二羧酸轉(zhuǎn)運蛋白   三羧酸循環(huán)   腎小管   亞細胞定位   連接效率  

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