維甲酸受體β基因RNAi表達質(zhì)粒的構建及其對A549細胞增殖和分化的影響

目的:利用RNA干擾(RNAi)技術,構建針對維甲酸受體(RAR)β基因的小干擾RNA(siRNA)表達質(zhì)粒,誘導RARβ基因沉默,并觀察其對肺癌細胞A549株的細胞周期和增殖的影響.方法:依據(jù)設計siRNA的原則,針對人RARβ的mRNA序列,設計并合成編碼siRNA的2條寡核苷酸序列,經(jīng)退火成互補雙鏈,再克隆到pSUPER-NEO-GFP真核表達載體中構建重組體pSUPER-RARβ,轉(zhuǎn)染至A549細胞中,以空質(zhì)粒和RARβ高表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染為對照,用Western印跡檢測RARβ基因的表達,并采用MTT試驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞株的增殖和細胞分化情況.結(jié)果:表達人類RARβ基因的siRNA重組表達質(zhì)粒構建成功;MTT試驗結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染的A549-RARβ-si細胞增殖能力降低.結(jié)論:采用RNAi技術特異阻斷RARβ基因表達,通過轉(zhuǎn)染A549細胞,可使其細胞形態(tài)發(fā)生變化,并抑制其細胞生長.

作 者： 林嬋 王力 邊六交 LIN Chan WANG Li BIAN Liu-Jiao   作者單位： 林嬋,邊六交,LIN Chan,BIAN Liu-Jiao(西北大學,基因工程中心,陜西,西安,710069)

王力,WANG Li(中國科學院,上海生命科學院研發(fā)中心,上海,200233) 

刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78 Q25  關鍵詞： 維甲酸受體β   RNA干擾   A549細胞   基因表達抑制  

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