牙鲆堿性磷酸酶基因5調(diào)控區(qū)的克隆及其功能檢測(cè)

通過(guò)基因組步移的方法擴(kuò)增出一段924bp的牙鲆堿性磷酸酶基因5'調(diào)控區(qū)序列,在線軟件分析表明5'調(diào)控區(qū)內(nèi)可能含有GKLF、Oct、CREB、E2F、CEBP、GATA-1、Pitx-1、Pit-、RARE/TRE、AP4等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn).采用DNA重組的方法,將克隆得到的5'調(diào)控區(qū)片段插入啟動(dòng)子缺失的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白表達(dá)載體pEGFP-1中,構(gòu)建重組表達(dá)載體pEGFP-JFALP.重組載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,在倒置熒光顯微鏡下可以檢測(cè)到綠色熒光信號(hào),且熒光信號(hào)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng).結(jié)果 表明本實(shí)驗(yàn)克隆的牙鲆堿性磷酸酶基因5'調(diào)控區(qū)具有一定的啟動(dòng)子活性,為今后進(jìn)一步研究堿性磷酸酶基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ).

作 者： 施志儀 顧一峰 陳曉武 胡燕林 Shi Zhiyi Gu Yifeng Chen Xiaowu Hu Yanlin   作者單位： 上海水產(chǎn)大學(xué)生物技術(shù)研究中心,上海,200090  刊 名： 生物技術(shù)通報(bào)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2008 ""(2)  分類號(hào)： Q95  關(guān)鍵詞： 堿性磷酸酶   基因   5'調(diào)控區(qū)   克隆   功能  

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