丙型肝炎病毒NS5B全長(zhǎng)基因及截短形式基因的克隆、表達(dá)及鑒定

目的 構(gòu)建丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-FL、NS5B-C21和NS5B-C51重組原核表達(dá)載體,并進(jìn)行目的蛋白的表達(dá)及鑒定.方法 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增3種長(zhǎng)度的NS5B基因,經(jīng)BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切后連接到經(jīng)同樣酶切的原核表達(dá)載體pET-28a(+)上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,并進(jìn)行純化及鑒定.結(jié)果 所構(gòu)建的3種重組質(zhì)粒pET-28a(+)-NS5B-FL、pET-28a(+)-NS5B-C21和pET-28a(+)-NS5B-C51,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后,經(jīng)PCR及酶切鑒定,均能擴(kuò)增或酶切出相應(yīng)大小的目的基因片段,表達(dá)的6His-NS5B-FL融合蛋白主要以包涵體形式存在,而表達(dá)的6His-NS5B-C21和6His-NS5B-C51融合蛋白的可溶性明顯增加.純化的6His-NS5B-C21蛋白未發(fā)生降解,6His-NS5B-FL和6His-NS5B-C51蛋白發(fā)生了部分降解.純化后的3種蛋白均能與丙肝患者血清發(fā)生反應(yīng).結(jié)論 已成功構(gòu)建了3種NS5B基因的重組表達(dá)載體,并獲得了目的蛋白表達(dá),為進(jìn)一步抗HCV藥物的篩選奠定基礎(chǔ).

作 者： 楊華鳳 潘明潔 呂敏 李越希   作者單位： 楊華鳳,呂敏(南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系,南京,210029)

潘明潔,李越希(南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所,南京,210002) 

刊 名： 中國(guó)生物制品學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(1)  分類(lèi)號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 丙型肝炎病毒   非結(jié)構(gòu)區(qū)5B蛋白   克隆   表達(dá)  

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