攜帶人TGF-β1腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定

目的 構(gòu)建攜帶人轉(zhuǎn)化生長因子β1(hTGF-β1)的腺病毒載體(Adeno-hTGF-β1),為hTGF-β1基因轉(zhuǎn)染骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的研究奠定基礎(chǔ).方法 應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建hTGF-β1腺病毒表達(dá)載體,分別用限制性內(nèi)切酶酶切和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)鑒定,并通過脂質(zhì)體Fugene 6介導(dǎo)腺病毒DNA轉(zhuǎn)染293細(xì)胞.結(jié)果 重組hTGF-β1腺病毒DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段.與空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置換成4.2 kb和4.0 kb片段;經(jīng)PI-SceⅠ/I-CeuⅠ雙酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小無誤,表明重組Adeno-hTGF-β1腺病毒表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功.以重組Adeno-hTGF-β1DNA為模板的PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功連接至adeno-X腺病毒表達(dá)載體中.重組hTGF-β1腺病毒表達(dá)載體通過Fugene 6 介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293 包裝細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE).采用PCR反應(yīng)鑒定293細(xì)胞包裝的腺病毒,證實(shí)擴(kuò)增出247 bp的hTGF-β1目的基因片斷和312 bp的腺病毒骨架基因片斷.結(jié)論 攜帶人hTGF-β1的腺病毒載體的構(gòu)建成功,并能在293細(xì)胞包裝,為hTGF-β1基因轉(zhuǎn)染的BMSCs在軟骨組織工程中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).

作 者： 夏萬堯 劉偉 王丹茹 丁文龍 鐘梅芳 劉德莉 周廣東 崔磊 曹誼林 XIA Wan-yao LIU Wei WANG Dan-ru DING Wen-long ZHONG Mei-fang LIU De-li ZHOU Guang-dong CUI Lei CAO Yi-lin   作者單位： 夏萬堯,劉偉,王丹茹,劉德莉,周廣東,崔磊,曹誼林,XIA Wan-yao,LIU Wei,WANG Dan-ru,LIU De-li,ZHOU Guang-dong,CUI Lei,CAO Yi-lin(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第九人民醫(yī)院整復(fù)外科,上海市組織工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200011)

丁文龍,鐘梅芳,DING Wen-long,ZHONG Mei-fang(上海交通大學(xué),基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室,上海,200011) 

刊 名： 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 26(10)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 基因重組   腺病毒   轉(zhuǎn)化生長因子β1  

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