結(jié)締組織生長(zhǎng)因子特異性結(jié)合肽的表達(dá)及分離純化

目的:利用基因工程技術(shù)獲得與結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)特異性結(jié)合的小肽.方法:設(shè)計(jì)并合成帶有腸激酶切割位點(diǎn)的基因片段,插入pET-32(a)+質(zhì)粒載體中硫氧化還原蛋白基因下游,構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入E.coli BL21表達(dá)菌中,用終濃度1mmol·L-1的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白;用熱變性和硫酸銨分級(jí)沉淀對(duì)融合蛋白進(jìn)行初步純化,然后用親和層析進(jìn)一步純化,經(jīng)腸激酶切割,最后用凝膠過(guò)濾層析分離獲得目的小肽;用反相色譜對(duì)所獲小肽進(jìn)行純度鑒定.結(jié)果:所構(gòu)建的重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與預(yù)期一致;誘導(dǎo)表達(dá)后用SDS-PAGE鑒定,發(fā)現(xiàn)在相對(duì)分子質(zhì)量20 000處有濃密的表達(dá)條帶出現(xiàn),與預(yù)期一致;融合蛋白用熱變性和硫酸銨分級(jí)沉淀進(jìn)行初步純化,得率分別為78.6%和52.3%;用親和層析純化得率為50.5%;經(jīng)腸激酶切割后用凝膠過(guò)濾層析分離獲得目的小肽,用反相色譜鑒定其純度大于95%;最終每升發(fā)酵液獲得3.4mg目的肽.結(jié)論:成功制備CTGF特異性結(jié)合肽,為進(jìn)一步研究該小肽的生物學(xué)活性打下基礎(chǔ).

作 者： 王明虹 吳國(guó)球 劉乃豐 WANG Ming-hong WU Guo-qiu LIU Nai-feng   作者單位： 王明虹,劉乃豐,WANG Ming-hong,LIU Nai-feng(東南大學(xué),臨床醫(yī)學(xué)院,江蘇,南京,210009)

吳國(guó)球,WU Guo-qiu(東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院,臨床檢驗(yàn)中心,江蘇,南京,210009) 

刊 名： 東南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2008 27(4)  分類(lèi)號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子   分離純化   特異性肽  

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