圓二色譜研究Asp44在穩(wěn)定肌紅蛋白結構中的作用

摘要：為了了解肌紅蛋白Mb分子表面44位天冬氨酸對穩(wěn)定肌紅蛋白結構的影響,用PCR定點突變的技術將肌紅蛋白(Mb)基因上的第44位天冬氨酸的密碼子GAT突變成賴氨酸的密碼子AAA,獲得突變體D44K基因,將突變體基因克隆在肌紅蛋白表達質粒pGYM上,轉化大腸桿菌BL21,突變蛋白D44K在大腸桿菌中大量表達,收集菌體.酶法裂解細菌,依次用硫酸銨沉淀、離子交換柱層析、凝膠柱層析分離純化得突變肌紅蛋白D44K.用圓二色譜分別研究野生型肌紅蛋白及其突變體(D44K)的耐熱及耐酸的變性過程.實驗結果表明:用堿性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44殘基,增強了肌紅蛋白耐熱變性能力,導致蛋白質的熱變性中點溫度Tm由71.9 ℃增加到75.1 ℃,但對肌紅蛋白耐酸變性的能力影響不大. 作者： 王靜云[1]劉丹[1]唐乾[2]包永明[1]鄭學仿[3]安利佳[1] Author： WANG Jing-yun[1]  LIU Dan[1]  TANG Qian[2]  BAO Yong-ming[1]  ZHENG Xue-fang[3]  AN Li-Jia[1] 作者單位： 大連理工大學環(huán)境生命學院,遼寧,大連,116024大連理工大學環(huán)境生命學院,遼寧,大連,116024;遼寧省高校生物有機重點實驗室,大連大學,遼寧,大連,116622遼寧省高校生物有機重點實驗室,大連大學,遼寧,大連,116622 期 刊： 光譜學與光譜分析   ISTICEISCIPKU Journal： SPECTROSCOPY AND SPECTRAL ANALYSIS 年，卷(期)： 2008, 28(2) 分類號： Q518.4 關鍵詞： 肌紅蛋白    定點突變    圓二色譜    蛋白質結構    結構穩(wěn)定性    機標分類號： TS2 R73 機標關鍵詞： 色譜研究    蛋白結構    肌紅蛋白    突變體    天冬氨酸    轉化大腸桿菌    離子交換柱層析    熱變性    密碼子    基因克隆    酸性氨基酸    凝膠柱層析    硫酸銨沉淀    堿性氨基酸    圓二色譜    突變蛋白    能力影響    耐酸    耐熱    酶法裂解 基金項目： 國家自然科學基金，教育部留學回國人員科研啟動基金

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