小鼠神經(jīng)生長因子前導(dǎo)肽和人內(nèi)嗎啡肽-2融合基因重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定

目的:制備并鑒定攜帶小鼠神經(jīng)生長因子前導(dǎo)肽(PN)和人內(nèi)嗎啡肽-2(EM-2)融合基因的重組非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的基因經(jīng)酶切插入pAxCAwt載體,構(gòu)建PN-EM-2-pAxCAwt重組黏粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞獲取重組腺病毒.PCR鑒定后擴(kuò)增不含野生型病毒的陽性克隆并純化,采用TCID50法測定病毒滴度;體外感染NIH3T3細(xì)胞觀察轉(zhuǎn)基因的表達(dá),酶聯(lián)免疫反應(yīng)(EIA)法測定表達(dá)產(chǎn)物濃度.結(jié)果:融合基因序列正確,PCR可檢測到401 bp的融合基因條帶并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度為2.03×1010pfu/ml.NIH3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒后,細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)可檢測到EM-2的表達(dá),明顯高于空轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞(P＜0.05),且隨時(shí)間的延長,表達(dá)水平逐漸上升.結(jié)論:成功構(gòu)建能夠在非神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)基因表達(dá)成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,為進(jìn)一步將其應(yīng)用于慢性疼痛的基因治療奠定了基礎(chǔ).

作 者： 吳飛翔 俞衛(wèi)鋒 黃盛東 徐學(xué)武 龔德軍 董剛 袁揚(yáng) 孫玉明   作者單位： 吳飛翔,俞衛(wèi)鋒,徐學(xué)武,董剛,孫玉明(第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院麻醉科,上海,200438)

黃盛東,龔德軍,袁揚(yáng)(第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院胸心外科,解放軍胸心外科研究所,上海,200433) 

刊 名： 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY　MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2007 28(11)  分類號：   關(guān)鍵詞： 內(nèi)嗎啡肽-2   神經(jīng)生長因子   腺病毒科  

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